本课程系统介绍高通量测序技术的三代演进。第一代Sanger法基于双脱氧终止与电泳分离，准确性高但通量低。第二代以Illumina和MGI为代表，采用边合成边测序及可逆阻断技术，通过芯片扩增成簇、循环延伸荧光标记碱基并激光扫描读取序列，支持多样本并行测序。第三代包括PacBio单分子实时测序（SMRT）和ONT纳米孔测序，前者在零模波导孔中监测聚合酶合成过程，获得长读长且错误随机；后者利用纳米孔蛋白与马达蛋白，通过电信号识别碱基，支持超长读长及直接检测甲基化。课程最后对比三代技术在通量、读长、准确率及应用场景上的差异，为基因组学研究提供方法学指导。